Méthodes analytiques officielles

En cas de hausse de mortalité dans les élevages conchylicoles ou sur les gisements de coquillages, des déclarations sont réalisées par les professionnels auprès du réseau de surveillance zoosanitaire REPAMO via le site internet du réseau https://www.repamo.fr/login

Les prélèvements de coquillages seront réalisés par les professionnels et analysés en histologie dans des laboratoires agréés afin d’écarter la présence d’agents réglementés.

Des analyses complémentaires peuvent être réalisées notamment pour rechercher la présence éventuelle de l’herpèsvirus OsHV-1 et de bactéries appartenant au genre Vibrio et plus particulièrement à l’espèce Vibrio aestuarianus.

Des protocoles pour la recherche de différents agents infectieux de mollusques dont les agents réglementés sont disponibles sur le site du LRUE : https://www.eurl-mollusc.eu/SOPs

Les protocoles des méthodes officielles au niveau national sont disponibles ci-dessous.

Ouverture et examen macroscopique des coquillages

  • Ouverture, rappels anatomiques et examen macroscopique des mollusques

Recherche du virus OsHV-1 et de la bactérie Vibrio aestuarianus par PCR temps réel

  • Préparation des échantillons

- Conservation et préparation des échantillons 

  • Extraction d’ADN

Deux protocoles d’extraction sont disponibles et utilisent le QIAamp® DNA Mini Kit (QIAGEN).

- Protocole Blood 

- Protocole Tissue 

Remarque : D’autres kits commerciaux peuvent être utilisés pour les extractions d'ADN à condition qu'il ait été démontré qu’ils donnent des résultats similaires.

  • Détection du virus OsHV-1 par PCR temps réel

Deux méthodes peuvent être utilisées pour détecter le virus OsHV-1 :

- PCR temps réel SYBR®Green OsHV-1 (adaptée de Pépin et al. 2008) 

- PCR temps réel TaqMan® (adaptée de Martenot et al. 2010)

Les laboratoires agréés ou reconnus sont libres d’utiliser l’une ou l’autre de ces méthodes.

  • Détection de la bactérie Vibrio aestuarianus par PCR temps réel

-  PCR temps réel TaqMan® (adaptée de Saunier et al. 2009)

 

Recherche de bactéries appartenant au genre Vibrio

Mise en culture, isolement et caractérisation par PCR en temps réel multiplex de certaines espèces de Vibrio

Recherche des agents réglementés par histologie

  • Préparation des échantillons de mollusques pour l’histologie
  • Observations des agents réglementés en histologie